Mengukur Kinetika Enzim
Sebagai sedikit latar belakang, enzim adalah protein yang bertindak sebagai katalis dalam mengurangi jumlah energi aktivasi untuk suatu reaksi terjadi. Energi aktivasi adalah energi yang diperlukan untuk mendapatkan reaksi "mulai" karena banyak reaksi tidak terjadi sangat cepat (atau terjadi sama sekali) jika mereka termodinamika mungkin.
Enzim mengkatalisis reaksi spesifik di situs tertentu (dikenal sebagai situs aktif) di mana reaktan mengikat dan bereaksi untuk menghasilkan produk. Substrat memiliki situs aktif yang khusus hanya untuk mereka sehingga tidak ada zat lain yang mengikat atau bereaksi di situs yang sama. Seperti kunci dan kunci, setiap enzim hanya akan mengkatalisis satu reaksi spesifik (dengan beberapa pengecualian).
Aktivitas khusus digunakan dalam metode isolasi protein untuk menunjukkan persentase pemurnian. Penting untuk mengetahui unit ini ketika membeli enzim untuk menunjukkan dengan tepat seberapa banyak enzim murni yang Anda dapatkan.
Ketika mengukur kinetika enzim (laju reaksi enzim dengan substrat - atau permukaan), aktivitas spesifik didefinisikan sebagai jumlah substrat yang diubah enzim (reaksi dikatalisasi), per protein mg dalam persiapan enzim, per satuan waktu.
Contoh aktivitas spesifik adalah:
- Aktivitas spesifik dari enzim yang terisolasi diukur pada 150 umoles / min / mg protein sebelum pemurnian dan 800 umoles / min / mg, setelah pemurnian.
Aktivitas khusus adalah ukuran penting kemurnian enzim. Batch yang berbeda dari enzim murni harus memiliki nilai yang sama dan bahkan menipiskan larutan enzim berkali-kali akan memiliki nilai aktivitas spesifik yang sama meskipun akan ada nilai aktivitas enzim yang berbeda. Ini karena dalam menghitung aktivitas spesifik, pembilang (unit / ml) dan penyebut (mg / ml) dipengaruhi sama.
Aktivitas spesifik sangat berbeda dari aktivitas, tetapi perhitungan aktivitas tertentu masih tergantung pada nilai aktivitas. Ini berarti bahwa nilai aktivitas spesifik yang disebutkan juga akan tergantung pada definisi unit enzim.
Batch enzim yang memiliki nilai aktivitas spesifik yang lebih rendah dari yang diharapkan mungkin mengandung molekul enzim yang telah diubah atau dicampur dengan kotoran.
Faktor yang Mempengaruhi Aktivitas Enzim
Ada kemungkinan bahwa satu enzim mungkin memiliki nilai aktivitas terukur berbeda ketika diukur di laboratorium yang berbeda (yaitu perbedaan nyata dalam aktivitas terukur, bukan perbedaan nyata yang disebabkan oleh penggunaan definisi unit yang berbeda).
Cara pengujian dilakukan (metode pengujian untuk menentukan kemurnian enzim) akan mempengaruhi nilai aktivitas yang dilaporkan. Misalnya, enzim umumnya lebih aktif di antara suhu 37 derajat Celcius dibandingkan pada 20 derajat Celcius, jadi jika pengujian dilakukan pada 21 derajat Celcius, nilainya akan berbeda dari pengujian yang dilakukan pada suhu 32 derajat Celsius (biasanya , tes dilakukan pada suhu antara 20-37 derajat Celcius).
Dengan demikian, definisi unit enzim akan lebih baik dinyatakan sebagai 1 unit (U) adalah jumlah enzim yang mengkatalisis reaksi 1 nmol substrat per menit dalam kondisi standar.