Apa Vektor Harus Dilakukan dengan Gen dan Kloning
Dalam kloning molekuler, vektor adalah molekul DNA yang berfungsi sebagai pembawa untuk transfer atau penyisipan gen asing ke dalam sel lain, di mana ia dapat direplikasi dan / atau diekspresikan. Vektor adalah salah satu alat penting untuk kloning gen dan sangat berguna jika mereka juga mengkodekan beberapa jenis gen penanda yang menyandikan molekul bioindikator yang dapat diukur dalam penilaian biologis untuk memastikan penyisipan dan ekspresi mereka, dalam organisme inang.
Secara khusus, vektor kloning adalah DNA yang diambil dari virus, plasmid atau sel (organisme yang lebih tinggi) untuk disisipkan dengan fragmen DNA asing untuk tujuan kloning. Karena vektor kloning dapat stabil dipertahankan dalam suatu organisme, vektor juga mengandung fitur yang memungkinkan untuk penyisipan atau penghapusan DNA yang nyaman. Setelah dikloning menjadi vektor kloning, fragmen DNA dapat lebih jauh dikloning menjadi vektor lain yang dapat digunakan dengan lebih spesifik.
Dalam beberapa kasus, virus digunakan untuk menginfeksi bakteri. Virus-virus ini disebut bacteriophages, atau fage, untuk pendek. Retrovirus adalah vektor yang sangat baik untuk memperkenalkan gen ke dalam sel-sel hewan. Plasmid, yang merupakan potongan DNA melingkar, adalah vektor yang paling umum digunakan untuk memperkenalkan DNA asing ke dalam sel bakteri. Mereka sering membawa gen resistensi antibiotik yang dapat digunakan untuk menguji ekspresi DNA plasmid, di piring petri antibiotik.
Transfer gen ke dalam sel tumbuhan umumnya dilakukan dengan menggunakan bakteri tanah Agrobacterium tumefaciens , yang bertindak sebagai vektor dan menyisipkan plasmid besar ke dalam sel inang. Hanya sel-sel yang mengandung vektor kloning yang akan tumbuh ketika ada antibiotik.
Jenis-jenis Utama Kloning Vektor
Keenam jenis utama vektor adalah:
- Plasmid. DNA ekstrachromosom sirkuler yang secara otonom bereplikasi di dalam sel bakteri. Plasmid umumnya memiliki nomor salinan tinggi, seperti pUC19 yang memiliki jumlah salinan 500-700 eksemplar per sel.
- Phage. Molekul DNA linier berasal dari bacteriophage lambda. Dapat diganti dengan DNA asing tanpa mengganggu siklus hidupnya.
- Cosmid. Molekul DNA ekstrachromosomal melingkar lain yang menggabungkan fitur plasmid dan fag.
- Kromosom Buatan Bakterial. Berdasarkan plasmid mini-F bakteri.
- Kromosom Buatan Ragi. Ini adalah kromosom buatan yang mengandung telomeres (buffer yang dapat dibuang di ujung kromosom yang terputus selama pembelahan sel) dengan asal-usul replikasi, sentromer ragi (bagian dari kromosom yang menghubungkan kromatid saudara atau dyad), dan penanda yang dapat dipilih. untuk identifikasi dalam sel ragi.
Kromosom Buatan Manusia. Jenis vektor ini berpotensi berguna untuk pengiriman gen ke dalam sel manusia, dan alat untuk studi ekspresi dan menentukan fungsi kromosom manusia. Ini dapat membawa fragmen DNA yang sangat besar.
Semua vektor yang direkayasa memiliki asal-usul replikasi (pengganda), situs kloning (terletak di mana penyisipan DNA asing tidak mengganggu replikasi atau inaktivasi penanda penting), dan penanda yang dapat dipilih (biasanya gen yang memberikan resistensi terhadap antibiotik.)