Buffer Ini Digunakan untuk Mempelajari Gerakan DNA
Buffer ini memiliki kekuatan ionik rendah dan kapasitas buffering rendah. Paling cocok untuk elektroforesis potongan DNA besar (> 20 kb) dan perlu diganti secara teratur atau diresirkulasi agar waktu gel berjalan lebih lama (> 4 jam).
Dengan memperhatikan hal itu, Anda mungkin ingin mempertimbangkan beberapa kumpulan buffer.
Mengingat bahwa buffer mudah dibuat dan langkah-langkahnya dapat dilakukan dengan cepat, membuat lebih dari satu batch pada satu waktu seharusnya tidak terlalu memakan waktu atau sulit untuk ditarik. Dengan menggunakan petunjuk di bawah ini, perlu waktu hanya 30 menit untuk membuat buffer TAE. Begini caranya:
Siapkan Solusi Stock EDTA
Suatu larutan EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) dipersiapkan sebelumnya. EDTA tidak akan benar-benar menjadi solusi sampai pH diatur hingga sekitar 8,0. Untuk larutan stok 500-mililiter 0,5 M EDTA, timbang 93,05 gram garam disodium EDTA (FW = 372,2). Larutkan dalam 400-mililiter air deionisasi dan sesuaikan pH dengan natrium hidroksida (NaOH). Tambahkan solusi hingga volume akhir 500 mililiter.
Whip Up a Stock Solution dari TAE
Buat larutan TAE terkonsentrasi (50x) dengan menimbang 242 gram basa Tris (FW = 121,14) dan melarutkannya dalam kira-kira 750 mililiter air deionisasi.
Hati-hati tambahkan 57,1 mililiter asam glasial dan 100 mililiter 0,5 M EDTA (pH 8,0). Setelah itu, sesuaikan solusinya ke volume akhir 1 liter. Larutan stok ini dapat disimpan pada suhu kamar. PH buffer ini tidak disesuaikan dan harus sekitar 8,5.
Siapkan Solusi Kerja dari TAE
Solusi kerja buffer 1x TAE dibuat hanya dengan mengencerkan larutan stok hingga 50x dalam air deionisasi.
Konsentrasi terlarut akhir adalah 40 mM. Tris-acetate dan 1 mM EDTA. Buffer sekarang siap digunakan dalam menjalankan gel agarosa.
Apa yang Anda Butuhkan untuk Buffer
Karena membuat buffer TAE hanya membutuhkan satu set instruksi yang cepat dan sederhana, jumlah material yang diperlukan untuk itu tidak berlebihan. Anda hanya membutuhkan EDTA disodium salt, basis Tris, dan asam asetat glasial.
Pembuatan buffer juga membutuhkan pH meter dan standar kalibrasi, yang sesuai. Anda juga akan membutuhkan gelas 600 mililiter dan 1500 mililiter atau termos serta silinder yang telah diluluskan. Akhirnya, Anda akan membutuhkan air deionisasi, batang pengaduk, dan pelat pengaduk.
Membungkus
Di mana Anda berencana membuat buffer - di situs sekolah, tempat kerja, atau lokasi lain, seperti rumah Anda? Periksa persediaan sebelum Anda mulai memastikan bahwa Anda memiliki semua bahan di atas untuk buffer TAE.
Jika Anda lebih suka tidak harus membayar bahan, memilih untuk membuat buffer di luar rumah Anda dianjurkan. Anda dapat dengan mudah memesan bahan yang Anda butuhkan secara online atau mengunjungi toko khusus untuk mereka.