Penyangga ini digunakan untuk pemisahan elektroforesis DNA
Penahan TBE sangat berguna untuk memisahkan fragmen DNA yang lebih kecil (MW <1000), seperti produk-produk kecil dari enzim restriksi yang dicerna.
TBE memiliki kapasitas buffering yang lebih besar dan akan memberikan resolusi yang lebih tajam daripada buffer TAE . Buffer TAE adalah solusi yang terdiri dari basa Tris, asam asetat dan EDTA (Tris-asetat-EDTA).
TBE umumnya lebih mahal daripada TAE dan menghambat DNA ligase, yang dapat menyebabkan masalah jika pemurnian DNA dan langkah-langkah ligasi selanjutnya dimaksudkan. Dengan tiga langkah sederhana berikut ini, pelajari cara membuat buffer TBE. Tidak perlu lebih dari 30 menit untuk membuat buffer ini. Begini caranya:
Siapkan Solusi Stock EDTA
Suatu larutan EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) harus dipersiapkan sebelumnya. EDTA tidak akan benar-benar menjadi solusi sampai pH diatur hingga sekitar 8,0. Untuk larutan stok 500-mililiter 0,5 M EDTA, timbang 93,05 gram garam disodium EDTA (FW = 372,2). Kemudian larutkan dalam 400 ml air deionisasi dan sesuaikan pH dengan NaOH. Setelah itu, tambahkan solusi ke volume akhir 500 mililiter.
Siapkan Stock Solution dari TBE
Buat larutan TBE yang terkonsentrasi (5x) dengan menimbang 54 g Basis Tris (FW = 121,14) dan 27,5 g asam borat (FW = 61,83) dan melarutkan keduanya dalam sekitar 900 mililiter air deionisasi. Kemudian tambahkan 20 mililiter 0,5 M EDTA (pH 8,0) dan sesuaikan larutan ke volume akhir 1 liter.
Larutan ini dapat disimpan pada suhu kamar tetapi endapan akan terbentuk dalam larutan yang lebih tua. Simpan buffer dalam botol kaca dan buang jika endapan telah terbentuk.
Persiapkan Solusi Kerja TBE
Untuk elektroforesis gel agarosa, buffer TBE dapat digunakan pada konsentrasi 0,5x (1:10 pengenceran dari stok terkonsentrasi). Encerkan larutan stok dengan 10x dalam air deionisasi. Konsentrasi terlarut akhir adalah 45 mM Tris-borat dan 1 mM EDTA. Buffer sekarang siap digunakan dalam menjalankan gel agarosa .
Apa yang kau butuhkan
Untuk membuat buffer TBE, Anda hanya perlu empat zat. Item yang tersisa di daftar ini adalah peralatan. Empat zat yang diperlukan adalah garam EDTA disodium, basa Tris, asam borat dan air deionisasi.
Untuk perlengkapan, Anda memerlukan standar pH meter dan kalibrasi, yang sesuai. Selain itu, Anda akan membutuhkan gelas atau termos 600-mililiter dan 1500-mililiter. Membulatkan kebutuhan peralatan Anda adalah silinder bertingkat dan batang pengaduk dan pelat pengaduk.
Periksa inventaris di lab yang akan Anda gunakan untuk memastikan Anda memiliki semua yang Anda butuhkan sebelum memulai. Tidak ada yang lebih buruk daripada harus berhenti di tengah menyiapkan solusi karena Anda kehabisan bahan yang tepat.
Jika lab Anda berada di sekolah atau di tempat kerja Anda, tanyakan kepada personel yang tepat untuk melihat bahwa mereka memiliki semua barang dalam persediaan. Melakukannya dapat menghemat waktu dan energi Anda pada akhirnya.