Buffer ini dapat digunakan untuk aplikasi biologi pada pH netral dekat
Tiga nilai pKa untuk asam fosfat (dari CRC Handbook of Chemistry and Physics) adalah 2,16, 7,21 dan 12,32. Monosodium fosfat dan basa konjugasinya, dinatrium fosfat biasanya digunakan untuk menghasilkan buffer nilai pH sekitar 7, untuk aplikasi biologi, seperti yang ditunjukkan di sini.
Membuat buffer ini sedikit lebih sulit daripada membuat buffer TAE dan TBE. Namun, ini tidak terlalu sulit. Cukup rata-rata. Butuh sekitar 10 menit untuk menyiapkan buffer ini. Begini caranya.
1. Tentukan Properti Buffer
Sebelum membuat buffer, pertama-tama Anda harus tahu molaritas apa yang Anda inginkan, volume apa yang harus dibuat dan apa pH yang diinginkan. Kebanyakan penyangga bekerja paling baik pada konsentrasi antara 0,1 M dan 10 M. pH harus berada dalam 1 unit pH asam / pKa basa konjugasi. Untuk mempermudah, perhitungan sampel ini akan untuk 1 liter buffer.
2. Tentukan Rasio Asam ke Basa
Gunakan persamaan Henderson-Hasselbalch (bawah) untuk menentukan rasio asam terhadap basa yang diperlukan untuk membuat buffer pH yang diinginkan. Gunakan nilai pKa terdekat dengan pH yang Anda inginkan dan rasionya akan mengacu pada pasangan konjugasi asam-basa yang sesuai dengan pKa tersebut.
HH Equation: pH = pKa + log ([Base] / [Acid])
Untuk buffer pH 6,9, [Base] / [Acid] = 0,4898
Pengganti untuk [Asam] dan Pecahkan untuk [Basis]
Molaritas yang diinginkan dari buffer adalah jumlah [Acid] + [Base].
Untuk buffer 1 M, [Basis] + [Asam] = 1 dan [Basis] = 1 - [Asam]
Dengan mengganti ini ke dalam persamaan rasio, dari langkah 2, Anda mendapatkan:
[Asam] = 0,6712 mol / L
Pecahkan untuk [Acid]
Menggunakan persamaan: [Basis] = 1 - [Asam], Anda dapat menghitung bahwa:
[Basis] = 0,3288 mol / L
3. Campur Asam dan Basa Konjugasi
Setelah Anda menggunakan persamaan Henderson-Hasselbalch untuk menghitung berapa rasio asam terhadap basa yang diperlukan untuk buffer Anda, siapkan hanya di bawah 1 liter larutan dengan menggunakan jumlah yang benar dari monosodium fosfat dan disodium fosfat.
4. Periksa pH
Gunakan probe pH untuk memastikan bahwa pH yang benar untuk buffer tercapai. Sesuaikan sedikit yang diperlukan, menggunakan asam fosfat atau natrium hidroksida (NaOH).
5. Perbaiki Volume
Setelah pH yang diinginkan tercapai, bawa volume buffer ke 1 liter. Kemudian encerkan buffer seperti yang diinginkan. Buffer yang sama ini dapat diencerkan untuk membuat buffer 0,5 M, 0,1 M, 0,05 M atau apapun di antaranya.
6. Tips untuk Buffer
Ingat bahwa pKa tidak mudah diukur ke nilai yang pasti. Nilai-nilai yang sedikit berbeda mungkin tersedia dalam literatur dari sumber yang berbeda.
7. Apa yang Anda Butuhkan
Untuk membuat buffer, Anda membutuhkan tiga zat, sedangkan bahan lainnya adalah peralatan. Zat-zat tersebut adalah monosodium fosfat, dinatrium fosfat, dan asam fosfat atau natrium hidroksida untuk mengatur pH.
Anda juga membutuhkan alat pengukur pH dan probe serta labware yang tepat. Ini termasuk termos volumetrik, silinder bertahap, gelas kimia, dan batang pengaduk.
Terakhir, Anda membutuhkan hot plate.