Cara Membuat Buffer Pewarnaan Immunohistokimia ini
Phosphate buffered saline (PBS) adalah larutan buffer yang umum digunakan untuk pewarnaan imunohistokimia (IHC) dan sering digunakan dalam penelitian biologi. PBS adalah larutan garam berbasis air yang mengandung natrium hidrogen fosfat, natrium klorida dan, dalam beberapa kasus, kalium klorida dan kalium dihidrogen fosfat.
Pewarnaan Immunohistokimia
Immunohistochemistry mengacu pada proses mendeteksi antigen seperti protein dalam sel-sel bagian jaringan dengan menggunakan prinsip antibodi yang mengikat khusus untuk antigen dalam jaringan biologis.
Pewarnaan immunofluorescent adalah metode pewarnaan imunohistokimia pertama.
Antigen menjadi terlihat ketika terkonjugasi dengan antibodi menggunakan pewarna fluoresensi karena reaksi pengikatan antigen-antibodi Proses ini terjadi ketika diaktifkan oleh cahaya yang menarik dari panjang gelombang tertentu di bawah mikroskop fluorescent.
Konsentrasi osmolaritas dan konsentrasi ion sesuai dengan yang dimiliki oleh tubuh manusia — mereka isotonik.
Resep untuk PBS
Anda dapat menyiapkan PBS dalam beberapa cara. Ada beberapa rumus. Beberapa dari mereka tidak mengandung potasium, sementara yang lain mengandung kalsium atau magnesium .
Resep ini relatif mudah. Ini untuk solusi stok 10X PBS (0,1M). Namun, Anda juga dapat membuat larutan stok 1X, atau mulai dengan resep 10X ini dan encerkan ke 1X.
Seluruh proses memakan waktu sekitar 10 menit.
Pilihan untuk menambahkan Tween juga disediakan.
Apa yang Anda Butuhkan untuk Membuat Buffer PBS
- Sodium fosfat monobasic (anhydrous)
- Sodium fosfat dibasic (anhydrous)
- Natrium klorida
- Timbangan dan timbang
- Pengaduk magnet dan batang pengaduk
- Probe pH yang dikalibrasi dan solusi yang tepat untuk menyesuaikan pH
- 1L labu ukur
- Tween 20 (opsional)
Cara Membuat Phosphate Buffered Saline (PBS)
Timbang 10.9g natrium fosfat natrium dibasic (Na2HPO4), 3.2g natrium fosfat monobasa anhidrat (NaH2PO4), dan 90g natrium klorida (NaCl).
Larutkan hanya di bawah air suling 1L.
Sesuaikan pH hingga 7,4 dan buat solusi hingga volume akhir 1L.
Encerkan 10X sebelum digunakan dan sesuaikan kembali pH jika perlu.
Anda dapat membuat larutan PBS yang mengandung 0,5 persen Tween 20 dengan menambahkan 5mL Tween 20 ke solusi 1L.
Tips untuk Membuat Buffer PBS
Simpan buffer pada suhu kamar setelah Anda membuat solusi PBS.
Pereaksi non-anhidrat dapat digantikan tetapi Anda harus menghitung ulang massa yang tepat masing-masing untuk mengakomodasi molekul air yang ditambahkan.
Penggunaan Phosphate Buffered Saline (PBS)
Saliva buffered fosfat memiliki banyak kegunaan karena isotonik dan tidak beracun bagi sebagian besar sel. Ini dapat digunakan untuk mencairkan zat dan sering digunakan untuk membilas wadah sel. PBS dapat digunakan sebagai pelarut dalam berbagai metode untuk mengeringkan biomolekul karena molekul air di dalamnya akan terstruktur di sekitar zat-protein, misalnya. Ini akan "dikeringkan" dan diimobilisasi ke permukaan padat.
PH tetap stabil dan konsisten untuk mencegah penghancuran sel.
Lapisan tipis air yang mengikat substansi mencegah denaturasi atau perubahan konformasi lainnya. Buffer karbonat dapat digunakan untuk tujuan yang sama tetapi dengan efektivitas yang kurang.
PBS juga dapat digunakan untuk mengambil referensi spektrum ketika mengukur adsorpsi protein dalam ellipsometry.