Juga disebut sebagai Analisis RFLP, teknik ini memanfaatkan polimorfisme dalam kode genetik individu. Meskipun semua anggota suatu spesies pada dasarnya memiliki susunan genetik yang sama, perbedaan-perbedaan kecil ini menjelaskan variasi dalam fenotipe, seperti penampilan atau metabolisme, di antara individu-individu.
RFLP: Teknik Analisis dan Aplikasi
Teknik analisis RFLP melibatkan pemotongan wilayah tertentu DNA dengan variabilitas yang diketahui, dengan enzim restriksi, kemudian memisahkan fragmen DNA dengan elektroforesis gel agarose dan menentukan jumlah fragmen dan ukuran relatif.
Enzim restriksi adalah enzim, molekul protein, yang memotong DNA di situs restriksi. Intinya, sampel DNA dipecah dan dicerna oleh enzim restriksi. Fragmen yang dihasilkan dipisahkan sesuai dengan panjangnya dan pola ukuran fragmen akan berbeda untuk setiap individu yang diuji.
Proses RFLP penuh membutuhkan pelabelan probe, fragmentasi DNA, elektroforesis, blotting, hibridisasi, pencucian, dan autoradiografi. RFLP yang terdeteksi divisualisasikan menggunakan film X-ray dalam autoradiografi, di mana fragmen DNA dapat dilihat dan dianalisis setelah dipisahkan satu dengan elektroforesis.
Beberapa aplikasi untuk analisis RFLP meliputi:
- Sidik jari DNA . Para ilmuwan forensik dapat menggunakan analisis RFLP untuk mengidentifikasi para tersangka berdasarkan sampel-sampel bukti yang dikumpulkan pada adegan-adegan kejahatan.
- Ayah. RFLP juga digunakan dalam penentuan paternitas atau untuk melacak leluhur.
- Keanekaragaman genetik. Teknik ini dapat digunakan dalam mempelajari evolusi dan migrasi satwa liar, mempelajari pola pemuliaan pada populasi hewan dan dalam deteksi dan diagnosis penyakit tertentu.
Teknik menggunakan deteksi RFLP variasi dalam genom adalah alat vital dalam pemetaan genom dan analisis penyakit genetik. Jika lokasi gen penyakit tertentu sedang dicari dalam kromosom tertentu, maka peneliti akan menganalisis DNA anggota keluarga dengan penyakit tersebut, kemudian mencari pola pewarisan serupa dalam alel RFLP.
Setelah gen penyakit dilokalisasi, melakukan analisis RFLP pada anggota keluarga lainnya dapat mengungkapkan pembawa gen mutan atau sinyal risiko penyakit secara keseluruhan. Penting untuk dicatat bahwa teknik RFLP tidak banyak digunakan sekarang karena teknik yang lebih baru dan lebih kuat digunakan untuk analisis DNA dalam ilmu forensik dan beberapa bidang lainnya.
Aspek Negatif dari Analisis
Sayangnya, teknik analisis RFLP membosankan dan lambat. Selain membutuhkan sampel DNA dalam jumlah besar - sampel biasanya harus berukuran sekitar seperempat, yang relatif besar untuk sampel DNA - prosesnya, dari pelabelan probe hingga pencucian dan autoradiografi, dapat memakan waktu hingga satu sebulan penuh untuk menyelesaikan.
Hasil dari Proyek Genom Manusia telah cukup banyak menggantikan kebutuhan untuk RFLP. Proyek ini memungkinkan untuk menentukan seluruh urutan DNA yang ditemukan dalam sel manusia, genom manusia, dan untuk mengidentifikasi semua gen dalam gen manusia.