Cara Membekukan-Mengeringkan Budaya Bakteri (Lyophilization)

Lyophilization, atau pengeringan beku, adalah prosedur laboratorium singkat

Pengeringan beku, juga disebut liofilisasi atau cryodesiccation, adalah proses mengeluarkan air dari produk setelah dibekukan (dan kemudian ditempatkan di bawah vakum) yang memungkinkan es berubah dari padat menjadi uap, tanpa melalui fase cair. Es (atau pelarut beku lainnya) dikeluarkan dari produk melalui proses sublimasi dan molekul air terikat dikeluarkan melalui proses desorpsi.

Dasar-dasar Lyophilization

Salah satu cara terbaik untuk menyimpan kultur bakteri, jamur, ragi atau mikroorganisme lainnya untuk jangka waktu yang lama adalah dengan menggunakan proses pengeringan beku. Prosedur laboratorium singkat ini dapat dilakukan dengan pengering beku yang tersedia secara komersial yang akan melestarikan koleksi budaya Anda. Karena lyophilization adalah bentuk pengeringan yang paling rumit dan mahal, prosesnya biasanya terbatas pada bahan-bahan sensitif panas yang sensitif dan bernilai tinggi. Zat yang tidak rusak oleh pembekuan biasanya dapat diliofilisasi sehingga penyimpanan yang didinginkan tidak diperlukan.

Proses ini dapat memakan waktu tiga jam, dan selama 24 jam, tidak termasuk waktu pertumbuhan kultur.

Proses Langkah-demi-Langkah Lyophilization

1. Pertama, menumbuhkan budaya, atau rumput, dari mikroorganisme dalam semalam pada LB atau piring agar nutrien yang tepat lainnya.

2. Selanjutnya, siapkan botol penutup kerutan steril dengan autoklaf sebelumnya, dengan tutupnya (sumbat karet) ditempatkan longgar di atas. Tempatkan label kertas dicetak dengan identifikasi budaya di dalam tabung sebelum autoklaf. Sebagai alternatif, gunakan tabung dengan tutup yang dirancang untuk kemandulan .

1. Tambahkan 4 mL buffer liofilisasi ke piring. Jika perlu, sel-sel dapat ditunda menggunakan batang gelas steril.

2. Cepat transfer suspensi budaya ke botol steril. Tambahkan sekitar 1,5 mL per botol. Segel dengan tutup karet.

3. Bekukan suspensi budaya di dalam vial dengan menempatkan vial dalam lemari pendingin -20 derajat Celcius.

1. Setelah biakan dibekukan, siapkan freeze-dryer dengan menyalakannya dan biarkan waktu untuk suhu yang sesuai dan kondisi vakum untuk menstabilkan. Lakukan ini sesuai dengan instruksi pabrik untuk merek pengering beku tertentu yang Anda gunakan.

2. Hati-hati, dan secara aseptik, letakkan botol botol secara longgar di atas vial, agar uap air dapat keluar selama proses pengeringan beku, dan masukkan vial ke dalam ruang beku-pengering. Menerapkan vakum ke ruang sesuai dengan instruksi pabrikan.

3. Biarkan waktu budaya untuk sepenuhnya melimpah (mengering). Ini mungkin memerlukan waktu beberapa jam hingga semalam tergantung pada volume setiap sampel dan berapa banyak sampel yang Anda miliki.

4. Hapus sampel dari ruang pengering-beku sesuai dengan instruksi pabrikan dan segera segel botol dengan tutup karet, lalu puncak kerutan.

5. Simpan koleksi budaya terliofilisasi pada suhu kamar.

Produk yang Anda Butuhkan

• Pengering beku
• Nutrisi atau piring agar yang lain (dan inkubator untuk menumbuhkan budaya)
• Batang kaca
• Buffer Lyophilization
• Botol-botol paling tajam dengan sumbat karet (dan crimper untuk mengaplikasikan tutupnya)
• Freezer

<sub>Referensi:

SP Ilmiah. Prinsip Dasar Pengeringan Beku. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>